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1.

図書

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成田美和子
出版情報: 新潟 : 新潟大学医学部, [1989]
シリーズ名: 新潟大学学位論文 ; 新大院医博 || シンダイ インイハク ; 571
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論文(リポジトリ)

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後藤, 若奈 ; 山田, 峻也 ; 橋本, 誠雄 ; 増子, 正義 ; 小林, 果歩 ; 小川, 彩空 ; 柴崎, 康彦 ; 曽根, 博仁 ; 高橋, 益廣 ; 成田, 美和子
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  15  pp.1-8,  2018-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/49818
概要: 本研究室では,樹立した白血病性形質細胞様樹状細胞株PMDC05へCD80遺伝子を導入することにより強力な抗原提示能をもつPMDC11を作成している。腫瘍細胞とその腫瘍に対する抗原特異的細胞傷害性T細胞 (CTL)との間の免疫チェックポイント の強度に関する検査法開発を目指した基礎的研究としてPMDC11のCpG-Bによる機能の変化の有無と腫瘍抗原特異的CTLの増幅効果を検討した。CpG-B刺激は共抑制因子PD-L1及びPD-L2の発現を増加させることなく共刺激因子CD40及びCD83をわずかに高めた。WT1ペプチドパルスに加えてCpG-B刺激したPMDC11とWT1/MHC-tetramer^+細胞との共培養を行ったところ, WT1ペプチド抗原特異的CTLの著しい増加が認められた。この培養法は,腫瘍抗原特異的CTLの機能解析において応用可能と考えられた。<br />The leukemic plasmacytoid dendritic cell line (PMDC05) transduced with CD80 gene, which was previously established in our laboratory, was named PMDC11. PMDC11 cells have potent antigen-presenting ability. In this study, for the purpose to develop methods to examine the appearance of the immune checkpoints between tumor cells and antigen-specific cytotoxic T cells (CTLs) and to analyze those CTL function, we tried the expansion of WT1 specific CTL using PMDC11 as APCs. PMDC11 stimulated with CpG-B for 24 hours slightly enhanced the co-stimulatory factors CD40 and CD83 without increasing the expression of co-inhibitory factor PD-L1 and PD-L2. PMDC11 cells, which were pulsed WT1 peptide and stimulated with CpG-B, were co-cultured with WT1 / MHC-tetramer+ cells for 24 hours. As a result, the amplification of WT1 peptide antigen specific CTL was observed remarkably. Therefore, this amplification method is useful for development of an examination method on the strength of the immunity checkpoint, and it can be applied in the functional analysis of the anti-tumor antigen-specific CTL. 続きを見る
3.

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山田, 峻也 ; 後藤, 若奈 ; 小川, 彩空 ; 増子, 正義 ; 小林, 果歩 ; 柴崎, 康彦 ; 内山, 孝由 ; 瀧澤, 惇 ; 曽根, 博仁 ; 高橋, 益廣 ; 成田, 美和子
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  15  pp.9-17,  2018-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/49822
概要: 免疫チェックポイント阻害薬の臨床的効果により,抗原特異的細胞傷害性T細胞(CTL)が抗腫瘍作用において重要な役割を果たしていることが明らかとなった。腫瘍に対するCTLの臨床効果を予測する解析のためには,個別のヒトCTLの簡便なクローン性の増 幅方法の開発が必要である。我々は,MLPC法と強力な抗原提示能を有する樹状細胞株PMDC11を用いてWT1特異的CTLのクローン性増幅を試みた。数個のCTLから4週間の培養によって増幅した細胞群にはWT1特異的IFN-γ産生が確認された。この抗原特異的CTLの簡便で効率的な増幅方法は,免疫チェックポイント阻害因子,T細胞受容体(TCR)や腫瘍特異的表面抗原の解析に応用可能と思われた。<br />It is becoming clear that antigen-specific cytotoxic T cells (CTLs) play an important role in anti-tumor immune system due to the recent confirmation of clinical effects of immune-checkpoint inhibitors. We tried to amplify efficiently WT1 specific oligoclonal CTLs from the peripheral blood of the case treated with WT1 peptide vaccine using dendritic cell line PMDC 11 which was established in our laboratory. Antigen - specific IFN - γ - producing ability was confirmed in the amplified WT1- specific CTLs. This result means that the antigen - specific CTLs amplified by PMDC 11 maintain cytotoxic ability against to tumor specific antigen. This method of amplifying antigen-specific CTLs using MLPC and PMDC 11 will lead to application of CTL to clinical application and TCR and surface antigen analysis. 続きを見る
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西澤, 幹則 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 大岩, 恵理 ; 内山, 孝由 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  12  pp.69-75,  2015-09.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38964
概要: γδT細胞は様々な腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を有しており, in vitroにおいてゾレドロン酸を用いる事で末梢血単核球(PBMNC)から選択的に誘導することが可能であることから, γδT細胞の腫瘍に対する養子免疫療法への応用が期待されてい る。また, ゾレドロン酸で前処置した単球由来樹状細胞(moDC)でPBMNCを刺激することで, 従来の培養法に比べ効果的にγδT細胞を誘導すること可能であるという報告がある。そこで本検討では, 当研究室で樹立した白血病性形質細胞様樹状細胞株PMDC11を用いた場合でも, moDCと同様にγδT細胞をより効果的に誘導出来るか否かを検討した。ゾレドロン酸で24時間前処置したPMDC11でPBMNCを刺激することで従来の培養法に比べより効果的にγδT細胞を誘導することが可能であった。また,誘導されたγδT細胞の腫瘍細胞株に対する細胞傷害活性も確認された。以上のことから, γδT細胞を用いた養子免疫療法へのPMDC11の応用の可能性が示唆された。<br />γδT cells possess a cytotoxic activity against various human tumor cells and can be easily expanded by phosphoantigen stimulation in vitro. Thus, adoptive immunotherapy with γδT cells is an attractive strategy for tumor. It has been reported that dendritic cells (DCs) treated with aminobisphosphonates, such as zoledoronic acid (ZA), could more efficiently expand γδT cells than conventional culture protocol without DCs in tumor patients. On the other hand, we have reported that a leukemic plasmacytoid dendritic cell line transduced with CD80 gene, PMDC11, which was previously established in our laboratory, possess the function equivalent to conventional DCs. Here, in order to establish the method of generating potent γδT cells, we investigated whether ZA-treated PMDC11 cells could also expand γδT cells efficiently. γδT cell expansions were performed by co-culturing PB mononuclear cells (MNCs) with PMDC11 cells incubated with ZA for 24 hours. Co-culturing of PBMNCs with ZA-treated PMDC11 cells induced efficient expansion of γδT cells compared with the conventional culture protocol without PMDC11 cells. In the cytotoxicity assay, expanded γδT cells were used as effector cells and myeloma cell line (RPMI8226) was used as target cells. This assay demonstrated that expanded γδT cells possessed cytotoxicity against RPMI8226 in an effector-to-target ratiodependent manner. These finding showed that ZA-treated PMDC11 cells efficiently expanded γδT cells with cytotoxic activity. The present date suggested that the method of generating γδT cells by co-culturing PBMNCs with ZA-treated PMDC11 cells could be applicable to an efficient γδT cell adoptive immunotherapy for tumors. 続きを見る
5.

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大岩, 恵理 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 西澤, 幹則 ; 内山, 孝由 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  12  pp.77-82,  2015-09.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38959
概要: 抗原ペプチドが同定されていない腫瘍に対する細胞傷害性T細胞(CTL)を誘導するために,当研究室で樹立した白血病性形質細胞様樹状細胞株(leukemic plasmacytoid dendritic cell line; PMDC05)の直接 的な細胞傷害活性を検出することを目的とした。ペニシリン凍結乾燥処理したStreptococcus pyogenesの菌体成分(OK432)及びIFN-γを用いてPMDC05の刺激培養を行った。OK432及びIFN-γで刺激されたPMDC05は,刺激なしに比べてサイトカイン産生が増強し,標的細胞を有意に傷害した。以上のことから,OK432及びIFN-γで刺激されたPMDC05は,腫瘍細胞との共培養によって腫瘍抗原を提示し,腫瘍抗原特異的CTLを誘導するための有力な抗原提示細胞になり得ると考えられた。<br />A leukemic plasmacytoid dendritic cell line, PMDC05, which was previously established in our laboratory, showed the ability of inducing antigen specific cytotoxic T lymphocytes. For tumors that antigenic peptides are not identified, it would be necessary for PMDC05 to have direct cytotoxicity against tumor cells to uptake tumor antigens for presenting them to T cells. Therefore, we aimed to investigate the effects of OK432, penicillin-inactivated and lyophilized preparation of Streptococcus pyogenes which has been clinically used in Japan for more than 30 years, to activate PMDC05 cells. Stimulation of PMDC05 cells with OK432 and IFN-γenhanced the expression of CCR7 and TNF-related apoptosisinducing ligand (TRAIL). Also, we detected a higher cytokine production such as IL-6 and TNF-α compared with unstimulated PMDC05 cells. Furthermore, PMDC05 cells stimulated with OK432 and IFN-γshowed direct cytotoxicity against the tumor cell targets (T2A24 cells) expressing death-inducing receptors (DR4 and DR5). This might have occurred due to binding of TRAIL expressed on PMDC 05 cells with DR4/5 on T2A24 cells. These data suggest that by stimulation with OK432 and IFN-γPMDC05 cells could acquire direct antitumor cytotoxicity, which may be beneficial for PMDC05 cells to uptake tumor cell components for antigen presentation in case of PMDC05 cells are co-cultured with tumor cells. OK432/IFN-γ-stimulated PMDC05 cells, which are loaded with tumor antigen by co-culturing with tumor cells, could be used as potent antigen presenting cells for generating antigen specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) in antitumor cellular immunotherapy. 続きを見る
6.

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岩谷, 俊平 ; 成田, 美和子 ; 増子, 正義 ; 西澤, 幹則 ; 大岩, 恵理 ; 柴崎, 康彦 ; 内山, 孝由 ; 瀧澤, 淳 ; 曽根, 博仁 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  12  pp.83-89,  2015-09.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38963
概要: 抗原特異的細胞傷害性T細胞(CTL)は抗腫瘍免疫療法において重要な役割を担っている。微量残存CML細胞を根絶するため,imatinib療法を4年間受けたCML症例にWT1ペプチドワクチンを投与した。混合リンパ球ペプチド培養(MLPC)を行い ,WT1/MHC-tetramer+CD8+細胞の出現頻度の評価によって末梢血中のWT1特異的CTLの増幅効果の推移を確認した。その結果,WT1ペプチドワクチン投与を終了し6年経過した現在も,WT1特異的CTL はCD8陽性細胞中5-15x10^<-6>の頻度で検出され続けていることが確認された。CTLの検出の検討に加えて,長期間増幅されたWT1特異的CTLのT細胞受容体β鎖可変領域(TCRVβ)のレパトワを8回の解析を試みた。MLPC後,CD8+T細胞中のWT1特異的CTLの割合が高いwellについてレパトワ解析を行った。WT1ペプチドワクチンやMLPCには単一の9merのペプチドを使用したが,3種類のTCRVβの使用が見られた。imatinibとWT1ペプチドワクチン併用療法はCML症例においてWT1特異的CTLを長期間持続させる点で有効であることが確認された。さらに,本研究では,WT1特異的CTLにおいてはoligoclonalなTCRVβが使用されている可能性が示唆された。<br />Antigen specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) play an important role in cancer immunotherapy. To eradicate tumor cells, we administrated WT1 peptide vaccine for a CML patient who was being treated imatinib therapy. The appearance of WT1 specific CTLs in peripheral blood was confirmed by evaluating the frequency of MHC/WT1 tetramer+CD8+ T cells by using mixed lymphocyte peptide culture (MLPC) system. After the cessation of vaccination, WT1 specific CTLs remained at the level of 5-15x10^<-6> in CD8+ T cells, which is lasting thereafter for 6 years. These cells showed cytotoxicity against WT1 peptide with MHC classⅠ restricted. In order to identification of T cell receptor β-chain variable region (TCRVβ) in CML patient received WT1 peptide vaccine, We also investigated the usage of T CVβof WT1 specific CTLs. MLPC cells with high proportion of CD8+ WT1 tetramer+ T cells were assessed for TCRVβ usage by using TCRVβ gene family specific monoclonal antibodies and flow cytometry. Cells from each well cultured by MLPC showed various types of TCRVβ repertoires from well to well. WT1 peptide vaccination for an imatinib pretreated CML patient is effective in terms of longterm generation of WT1 specific CTLs with cytotoxicity against WT1 peptide. The present study suggested that CTLs detected by MLPC possessed oligoclonal features of TCRVβ gene used, but not identical. Taken together, CTLs induced by tumor antigen specific peptide are potent for antitumor immunity. 続きを見る
7.

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大岩, 恵理 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 西澤, 幹則 ; 内山, 孝由 ; 岩渕, 南 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  11  pp.57-65,  2014-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38934
概要: 抗腫瘍免疫療法施行例における治療効果を判定するために,in vitroで培養された腫瘍抗原特異的細胞傷害性T細胞(CTL)が特異的に抗原を認識し,細胞傷害機能を有するか調べることを目的とした。本検討では,in vivoに存在するWT1特異的 CTLを混合リンパ球ペプチド培養(mixed lymphocyte peptide culture; MLPC)によりin vitroで増幅し,WT1特異的CTLの機能解析を行った。in vitroで誘導されたWT1特異的CTLはWT1抗原特異的にIFN-γを合成し,細胞傷害活性を有することが確認された。以上のことから,WT1ペプチドワクチン施行例の末梢血中にはIFN-γの産生能と細胞傷害活性を持つWT1特異的CTLが存在し,これらのCTLはさらなるWT1ペプチドワクチンにより増幅されると考えられた。<br />Although the frequencies of cytotoxic T lymphocytes(CTLs)in peripheral blood(PB)can be evaluated by mixed lymphocyte peptide culture(MLPC), the function of tetramer+ CD8+ T cells induced by MLPC has not been studied extensively yet. Therefore, we aimed to explore the function of tetramer+ CD8+ T cells generated by MLPC. We confirmed that population of tetramer positive cells in MLPC produced IFN-γ by recall stimulation, using intracellular cytokine staining. This study showed that WT1 positive cells, which were induced by MLPC, have function of producing IFN-γ and killing target cells. The present findings suggest that WT1 peptide immunized persons hold WT1 specific CTLs and IFN-γ production and cytotoxicity in CTLs could be enhanced by further WT1 peptide vaccination. 続きを見る
8.

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内山, 孝由 ; 成田, 美和子 ; 小南, 亜紀 ; 大岩, 恵理 ; 岩渕, 南 ; 岩谷, 俊平 ; 西澤, 幹則 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  11  pp.67-74,  2014-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38945
概要: 抗原特異的細胞傷害性T細胞(CTL)のT細胞受容体(TCR)β鎖可変領域(Vβ)レパトワの同定は,より効果的なCTLを用いた免疫療法の確立に有効であると考える。そこで本研究では,混合リンパ球ペプチド培養(MLPC)法により誘導した抗原特異的 CTLのTCR Vβレパトワ解析を行った。培養前の健常人末梢血単核球を用いたTCR Vβレパトワ解析では,CD8+T細胞は個々に異なる使用頻度で24種類のTCR Vβを使用していた。培養後,CD8+T細胞中のCTLの割合が高いウェルの多くでは,単一のTCR Vβの使用が確認された。いくつかのウェルにおいては,oligoclonalなTCR Vβの使用が見られた。ヒト白血球抗原(HLA)-A*24:02に拘束性を有する9残基のペプチドを用いた本検討において,誘導CTLは,moloclonalではなく,oligoclonalなTCR Vβを使用していることが示唆された。<br />Identification of T-cell receptor (TCR) gene element usage of antigen specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) could be beneficial in terms of establishing the efficient CTL-based immunotherapy. In this study, we tried to elucidate the usage of TCR β chain variable regions (Vβ) of WT1 or CMVpp65 specific CTLs by using TCR Vβ gene family-specific monoclonal antibodies and flow cytometric analysis. In pre-culture analysis, the usage of TCR Vβ was diverse in CD8+ T cells of all samples. Predominant samples from MLPC with high proportion of CD8+MHC tetramer+ cells within CD8+ T cells showed the usage of a single TCR Vβ gene. However, oligoclonal usage of the TCR Vβ genes was observed in cells from some wells of MLPC containing CD8+MHC tetramer+ cells. The type of TCR Vβ repertoire in MLPC cells from each well was not identical and showed oligoclonal feature from well to well. In the present study using WT1 or CMVpp65 peptides, it is suggested that TCR Vβ genes used by peptide-induced CTLs are oligoclonal features even with a certain HLA-A24:02 restricted 9 mer peptide. 続きを見る
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西澤, 幹則 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 大岩, 恵理 ; 岩渕, 南 ; 内山, 孝由 ; 松山, 麻子 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  11  pp.75-82,  2014-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38941
概要: ウステキヌマブはヒト型抗ヒト interleukin(IL)-12/IL-23p40モノクローナル抗体製剤であり,乾癬の治療に用いられている。しかし,IL-12は抗腫瘍免疫において重要な役割を担うため,ウステキヌマブによる腫瘍発生率の増加が 懸念されている。今回の検討では,ウステキヌマブの抗原特異的癌免疫における影響を明らかにすることを目的とした。乾癬患者に対する in vivo の検討では,ウステキヌマブの投与により乾癬症状は改善されたが,腫瘍抗原特異的細胞傷害性 T 細胞(CTL)の frequency は投与開始以降も抑制されることはなかった。また in vitro の検討では,樹状細胞の抗原提示能及び抗原特異的 CTL の誘導に対するウステキヌマブの抑制効果は確認できなかった。これらの結果から,ウステキヌマブは樹状細胞の機能や腫瘍抗原特異的 CTL の誘導を抑制することなく乾癬症状を改善することが可能であり,ウステキヌマブ治療症例における腫瘍発症の増加は見られないという最近の臨床試験の知見を支持するものと考えられた。<br />Ustekinumab (a humanized monoclonal antibody against the common p40 subunit shared by IL-12 andIL-23) blocks the pathways of T helper (Th)-1 and Th-17, which play pivotal roles in cell-mediated immunity and production of pro-inflammatory cytokines. Ustekinumab is currently used for the treatment of moderate to severe psoriasis with remarkable efficiency. However, worries about the development of malignancies in ustekinumab-treated patients could not be completely cleared because of the major role of IL-12 and IL-23 in tumor immunity. In the present study, we tried to elucidate the effects of ustekinumab on antigen-specific tumor immunity. A 56 years-old male volunteer was subcutaneously administered with 20 times of WT1 peptide. WT1 tetramer+ CD8+ T cells appeared after the first peptide administration and the frequency of WT1 tetramer+ T cells elevated to more than 15 in 10^6 CD8+ T cells. He began to be treated with subcutaneous injections of ustekinumab for moderate psoriasis. Psoriasis plaques were almost cleared up at week 12. The frequency of WT1 tetramer+ T cells with cytotoxic ability has not changed for 22 months since the initiation of ustekinumab treatment. The effects of ustekinumab on antigen presenting and CTL inducing abilities of dendritic cells were explored in vitro, resulting in little effects on both immune functions. These in vivo/vitro findings imply that ustekinumab improves psoriasis without suppressing tumor antigen-specific cytotoxic T lymphocytes and support the data of recent clinical trials showing a comparable incidence of malignancies between ustekinumab-treated psoriatic patients and the control. 続きを見る
10.

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岩谷, 俊平 ; 成田, 美和子 ; 増子, 正義 ; 西澤, 幹則 ; 大岩, 恵理 ; 井田, 桃里 ; 岩渕, 南 ; 内山, 孝由 ; 柴崎, 康彦 ; 瀧澤, 淳 ; 曽根, 博仁 ; 高橋, 益廣
出版情報: 新潟大学保健学雑誌 = 新潟大学保健学雑誌.  11  pp.83-91,  2014-03.  新潟大学医学部保健学科
本文リンク: http://hdl.handle.net/10191/38944
概要: imatinibと改変型WT1ペプチドワクチンの併用療法を行ったHLA-A*24:02陽性の慢性骨髄性白血病慢性期(chronic myeloid leukemia-chronic phase;CML-CP)の症例に対し,ワクチン接種前から 4週間毎に14日の末梢血単核球を混合リンパ球ペプチド培養(mixed lymphocyte peptide culture;MLPC)行い,WT1/MHC-tetramer+ CD8+細胞の末梢血CD8陽性細胞中の頻度の変動を6年間継続して解析した。ペプチドを添加した自己B細胞株を標的細胞として細胞傷害活性試験を行い,今回検出されたWT1/MHC-tetramer+CD8+細胞は確実に細胞傷害活性を有することを確認した。WT1ペプチドワクチンの臨床効果も確認された。すなわち,ワクチン投与終了7ヶ月後には,bcr/ablコピー数が次第に減少しMMR(major molecular response;MMR) に入り, その後,CMR(complete molecular response;CMR)に到達し,WT1ペプチドワクチン投与終了後5年経過した現在もCMRは維持されている。WT1ペプチドワクチンとimatinib併用療法は,TKI(tyrosine kinase inhibitor;TKI)が十分に作用できないCML幹細胞に対し有効である可能性が示された。<br />To clarify the effectiveness and safety of WT1 peptide vaccination against the residual CML cells, we started WT1 peptide vaccination in combination with regular dose of imatinib for a CML-CP patient who had been treated with 400 mg imatinib for 4 years but not achieved MMR. HLA-A*24:02-restricted mutant type WT1 peptide vaccination was undertaken 22 times totally. The appearance of WT1-specific CTLs in PB was confirmed by evaluating the frequency of MHC/WT1 tetramer+CD8+ T cells by using mixed lymphocyte peptide culture(MLPC)system every 4 weeks. WT1 tetramer+ cells detected by MLPC system were investigated for WT1 specific cytotoxicity. Bcr-abl transcripts have decreased to less than 500 copies by the administration of WT1 peptides every 4 weeks. After 7 months from the cessation of vaccination, transcripts decreased to the level of CMR, which is lasting thereafter Tumor antigen specific peptide vaccine therapy in combination with molecular targeted therapy is one of the potent methods for eradicating cancer stem cells. 続きを見る