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大岩, 恵理 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 西澤, 幹則 ; 内山, 孝由 ; 岩渕, 南 ; 高橋, 益廣
概要:
抗腫瘍免疫療法施行例における治療効果を判定するために，in vitroで培養された腫瘍抗原特異的細胞傷害性T細胞（CTL）が特異的に抗原を認識し，細胞傷害機能を有するか調べることを目的とした。本検討では，in vivoに存在するWT1特異的
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CTLを混合リンパ球ペプチド培養（mixed lymphocyte peptide culture; MLPC）によりin vitroで増幅し，WT1特異的CTLの機能解析を行った。in vitroで誘導されたWT1特異的CTLはWT1抗原特異的にIFN-γを合成し，細胞傷害活性を有することが確認された。以上のことから，WT1ペプチドワクチン施行例の末梢血中にはIFN-γの産生能と細胞傷害活性を持つWT1特異的CTLが存在し，これらのCTLはさらなるWT1ペプチドワクチンにより増幅されると考えられた。<br />Although the frequencies of cytotoxic T lymphocytes（CTLs）in peripheral blood（PB）can be evaluated by mixed lymphocyte peptide culture（MLPC）, the function of tetramer+ CD8+ T cells induced by MLPC has not been studied extensively yet. Therefore, we aimed to explore the function of tetramer+ CD8+ T cells generated by MLPC. We confirmed that population of tetramer positive cells in MLPC produced IFN-γ by recall stimulation, using intracellular cytokine staining. This study showed that WT1 positive cells, which were induced by MLPC, have function of producing IFN-γ and killing target cells. The present findings suggest that WT1 peptide immunized persons hold WT1 specific CTLs and IFN-γ production and cytotoxicity in CTLs could be enhanced by further WT1 peptide vaccination.
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内山, 孝由 ; 成田, 美和子 ; 小南, 亜紀 ; 大岩, 恵理 ; 岩渕, 南 ; 岩谷, 俊平 ; 西澤, 幹則 ; 高橋, 益廣
概要:
抗原特異的細胞傷害性T細胞（CTL）のT細胞受容体（TCR）β鎖可変領域（Vβ）レパトワの同定は，より効果的なCTLを用いた免疫療法の確立に有効であると考える。そこで本研究では，混合リンパ球ペプチド培養（MLPC）法により誘導した抗原特異的
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CTLのTCR Vβレパトワ解析を行った。培養前の健常人末梢血単核球を用いたTCR Vβレパトワ解析では，CD8+T細胞は個々に異なる使用頻度で24種類のTCR Vβを使用していた。培養後，CD8+T細胞中のCTLの割合が高いウェルの多くでは，単一のTCR Vβの使用が確認された。いくつかのウェルにおいては，oligoclonalなTCR Vβの使用が見られた。ヒト白血球抗原（HLA）-A*24:02に拘束性を有する９残基のペプチドを用いた本検討において，誘導CTLは，moloclonalではなく，oligoclonalなTCR Vβを使用していることが示唆された。<br />Identification of T-cell receptor （TCR） gene element usage of antigen specific cytotoxic T lymphocytes （CTLs） could be beneficial in terms of establishing the efficient CTL-based immunotherapy. In this study, we tried to elucidate the usage of TCR β chain variable regions （Vβ） of WT1 or CMVpp65 specific CTLs by using TCR Vβ gene family-specific monoclonal antibodies and flow cytometric analysis. In pre-culture analysis, the usage of TCR Vβ was diverse in CD8+ T cells of all samples. Predominant samples from MLPC with high proportion of CD8+MHC tetramer+ cells within CD8+ T cells showed the usage of a single TCR Vβ gene. However, oligoclonal usage of the TCR Vβ genes was observed in cells from some wells of MLPC containing CD8+MHC tetramer+ cells. The type of TCR Vβ repertoire in MLPC cells from each well was not identical and showed oligoclonal feature from well to well. In the present study using WT1 or CMVpp65 peptides, it is suggested that TCR Vβ genes used by peptide-induced CTLs are oligoclonal features even with a certain HLA-A24:02 restricted 9 mer peptide.
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西澤, 幹則 ; 成田, 美和子 ; 岩谷, 俊平 ; 大岩, 恵理 ; 岩渕, 南 ; 内山, 孝由 ; 松山, 麻子 ; 高橋, 益廣
概要:
ウステキヌマブはヒト型抗ヒト interleukin（IL）-12/IL-23p40モノクローナル抗体製剤であり，乾癬の治療に用いられている。しかし，IL-12は抗腫瘍免疫において重要な役割を担うため，ウステキヌマブによる腫瘍発生率の増加が
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懸念されている。今回の検討では，ウステキヌマブの抗原特異的癌免疫における影響を明らかにすることを目的とした。乾癬患者に対する in vivo の検討では，ウステキヌマブの投与により乾癬症状は改善されたが，腫瘍抗原特異的細胞傷害性 T 細胞（CTL）の frequency は投与開始以降も抑制されることはなかった。また in vitro の検討では，樹状細胞の抗原提示能及び抗原特異的 CTL の誘導に対するウステキヌマブの抑制効果は確認できなかった。これらの結果から，ウステキヌマブは樹状細胞の機能や腫瘍抗原特異的 CTL の誘導を抑制することなく乾癬症状を改善することが可能であり，ウステキヌマブ治療症例における腫瘍発症の増加は見られないという最近の臨床試験の知見を支持するものと考えられた。<br />Ustekinumab （a humanized monoclonal antibody against the common p40 subunit shared by IL-12 andIL-23） blocks the pathways of T helper （Th）-1 and Th-17, which play pivotal roles in cell-mediated immunity and production of pro-inflammatory cytokines. Ustekinumab is currently used for the treatment of moderate to severe psoriasis with remarkable efficiency. However, worries about the development of malignancies in ustekinumab-treated patients could not be completely cleared because of the major role of IL-12 and IL-23 in tumor immunity. In the present study, we tried to elucidate the effects of ustekinumab on antigen-specific tumor immunity. A 56 years-old male volunteer was subcutaneously administered with 20 times of WT1 peptide. WT1 tetramer+ CD8+ T cells appeared after the first peptide administration and the frequency of WT1 tetramer+ T cells elevated to more than 15 in 10^6 CD8+ T cells. He began to be treated with subcutaneous injections of ustekinumab for moderate psoriasis. Psoriasis plaques were almost cleared up at week 12. The frequency of WT1 tetramer+ T cells with cytotoxic ability has not changed for 22 months since the initiation of ustekinumab treatment. The effects of ustekinumab on antigen presenting and CTL inducing abilities of dendritic cells were explored in vitro, resulting in little effects on both immune functions. These in vivo/vitro findings imply that ustekinumab improves psoriasis without suppressing tumor antigen-specific cytotoxic T lymphocytes and support the data of recent clinical trials showing a comparable incidence of malignancies between ustekinumab-treated psoriatic patients and the control.
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岩谷, 俊平 ; 成田, 美和子 ; 増子, 正義 ; 西澤, 幹則 ; 大岩, 恵理 ; 井田, 桃里 ; 岩渕, 南 ; 内山, 孝由 ; 柴崎, 康彦 ; 瀧澤, 淳 ; 曽根, 博仁 ; 高橋, 益廣
概要:
imatinibと改変型WT1ペプチドワクチンの併用療法を行ったHLA-A*24:02陽性の慢性骨髄性白血病慢性期（chronic myeloid leukemia-chronic phase；CML-CP）の症例に対し，ワクチン接種前から
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４週間毎に14日の末梢血単核球を混合リンパ球ペプチド培養（mixed lymphocyte peptide culture；MLPC）行い，WT1/MHC-tetramer+ CD8+細胞の末梢血CD8陽性細胞中の頻度の変動を６年間継続して解析した。ペプチドを添加した自己B細胞株を標的細胞として細胞傷害活性試験を行い，今回検出されたWT1/MHC-tetramer+CD8+細胞は確実に細胞傷害活性を有することを確認した。WT1ペプチドワクチンの臨床効果も確認された。すなわち，ワクチン投与終了７ヶ月後には，bcr/ablコピー数が次第に減少しMMR（major molecular response；MMR） に入り， その後，CMR（complete molecular response；CMR）に到達し，WT1ペプチドワクチン投与終了後５年経過した現在もCMRは維持されている。WT1ペプチドワクチンとimatinib併用療法は，TKI（tyrosine kinase inhibitor；TKI）が十分に作用できないCML幹細胞に対し有効である可能性が示された。<br />To clarify the effectiveness and safety of WT1 peptide vaccination against the residual CML cells, we started WT1 peptide vaccination in combination with regular dose of imatinib for a CML-CP patient who had been treated with 400 mg imatinib for 4 years but not achieved MMR. HLA-A*24:02-restricted mutant type WT1 peptide vaccination was undertaken 22 times totally. The appearance of WT1-specific CTLs in PB was confirmed by evaluating the frequency of MHC/WT1 tetramer+CD8+ T cells by using mixed lymphocyte peptide culture（MLPC）system every 4 weeks. WT1 tetramer+ cells detected by MLPC system were investigated for WT1 specific cytotoxicity. Bcr-abl transcripts have decreased to less than 500 copies by the administration of WT1 peptides every 4 weeks. After 7 months from the cessation of vaccination, transcripts decreased to the level of CMR, which is lasting thereafter Tumor antigen specific peptide vaccine therapy in combination with molecular targeted therapy is one of the potent methods for eradicating cancer stem cells.
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